Replik-Überzug

In der molekularen Biologie und Mikrobiologie ist Replik-Überzug eine Technik, in der oder mehr sekundäre Teller von Petri, die verschiedene feste (Agar-basierte) auswählende Wachstumsmedien enthalten (an Nährstoffen Mangel habend oder chemische Wachstumshemmstoffe wie Antibiotika enthaltend), mit denselben Kolonien von Kleinstlebewesen von einem primären Teller (oder Master-Teller) eingeimpft werden, das ursprüngliche Raummuster von Kolonien wieder hervorbringend. Die Technik ist mit dem Drücken einer Baumwollsamt-bedeckten Platte und dann der Prägung sekundärer Teller mit Zellen in Kolonien verbunden, die vom ursprünglichen Teller durch das Material entfernt sind. Allgemein große Anzahl von Kolonien sind (ungefähr 30-300) Replik gepanzert wegen der Schwierigkeit, jeden individuell auf einen getrennten Teller zu streifen.

Der Zweck des Replik-Überzugs ist im Stande zu sein, den Master-Teller und irgendwelche sekundären Teller zu vergleichen, normalerweise sich für einen selectable Phänotyp filmen zu lassen. Zum Beispiel, wenn eine Kolonie, die auf dem primären Teller (oder Master-Teller) da gewesen ist, scheitert, auf einem sekundären Teller zu erscheinen, zeigt es, dass die Kolonie zu einer Substanz auf diesem besonderen sekundären Teller empfindlich war. Allgemeine screenable Phänotypen schließen auxotrophy und antibiotischen Widerstand ein.

Jedoch kann der Phänotyp nicht sein, was bedeutend ist. Im Beispiel des Lambdas phage ist die Kolonie auf dem sekundären Teller erschienen, aber hat wie erwartet, nicht geschaut: Es wurde "genagt und plaqued", die Anwesenheit eines phage zeigend.

Replik-Überzug ist für die "negative Auswahl" besonders nützlich. Jedoch ist es richtiger, um sich auf die "negative Abschirmung" zu beziehen, anstatt den Begriff 'Auswahl' zu gebrauchen. Zum Beispiel, wenn ein Kolonien hat auswählen wollen, die zu ampicillin empfindlich waren, konnte der primäre Teller auf einem sekundären Ampere-Agar-Teller gepanzerte Replik sein. Die empfindlichen Kolonien auf dem sekundären Teller würden sterben, aber die Kolonien konnten noch aus dem primären Teller abgeleitet werden, da die zwei dieselben Raummuster von ampicillin widerstandsfähigen Kolonien haben. Die empfindlichen Kolonien konnten dann vom primären Teller weggenommen werden. Während er das oft tun wird, wird der letzte Teller in diesem Beispiel nichtauswählend sein, ein nichtauswählender Teller wird Replik gepanzert nach dem Ampere + Teller sein, um zu bestätigen, dass die Abwesenheit des Wachstums auf dem auswählenden Teller wegen der Auswahl selbst und nicht eines Problems mit überwechselnden Zellen ist. Grundsätzlich, wenn man Wachstum auf dem dritten (nichtauswählenden) Teller, aber nicht dem zweiten sieht, zeigt das an, dass der auswählende Agent für den Mangel am Wachstum verantwortlich ist; wenn der nichtauswählende Teller kein Wachstum dann zeigt, kann man nicht sagen, ob lebensfähige Zellen überhaupt übertragen wurden und keine Beschlüsse über die Anwesenheit oder Abwesenheit des Wachstums auf auswählenden Medien gemacht werden können. Das ist besonders nützlich, wenn es Fragen über das Alter oder die Lebensfähigkeit der Zellen auf dem ursprünglichen Teller gibt.

Durch die Erhöhung der Vielfalt von sekundären Tellern mit verschiedenen auswählenden Wachstumsmedien ist es möglich sich schnell filmen zu lassen eine Vielzahl der Person hat Kolonien für so viele Phänotypen isoliert, wie es sekundäre Teller gibt.

Die Entwicklung des Replik-Überzugs hat zwei Schritte verlangt. Der erste Schritt war, das Problem zu definieren: Eine Methode, identifizierbar Kolonien zu kopieren. Der zweite Schritt war, ein Mittel auszudenken, den ersten Schritt zuverlässig durchzuführen. Replik-Überzug wurde zuerst von Esther Lederberg (Hauptautor) und Joshua Lederberg 1952 beschrieben. Jedoch bemerkt Joshua Lederberg, dass der erste Schritt, das Problem zu definieren, durch andere vor ihm getan worden war. Mehrere Versuche wurden gemacht, den zweiten Schritt zu lösen. Genauer:

  • sterilisierte Zahnstocher (Ed. Tatum)
  • Zacken einer Leitungsbürste (A. Novick, L. Szilard)
  • Filterpapier (N. Visconti)

Der zweite Schritt, Durchführung mit Baumwollsamt-Stoff, mit den kleinen Punkten von Stoff, der als das Einimpfen von Nadeln handelt, wurde von Esther Lederberg durchgeführt.


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