Nukleinsäure-Elektrophorese ist eine analytische Technik, die verwendet ist, um DNA oder RNS-Bruchstücke durch die Größe und Reaktionsfähigkeit zu trennen. Nukleinsäure-Moleküle, die analysiert werden sollen, werden auf ein klebriges Medium, das Gel gesetzt, wo ein elektrisches Feld die Nukleinsäuren veranlasst, zur Anode wegen der negativen Nettoanklage des Zuckerphosphat-Rückgrats der Nukleinsäure-Kette abzuwandern. Die Trennung dieser Bruchstücke wird durch die Ausnutzung des mobilities vollbracht, mit dem verschiedene große Moleküle im Stande sind, das Gel durchzuführen. Längere Moleküle wandern langsamer ab, weil sie mehr Widerstand innerhalb des Gels erfahren. Weil die Größe des Moleküls seine Beweglichkeit betrifft, enden kleinere Bruchstücke näher zur Anode als längere in einer gegebenen Periode. Nach einer Zeit wird die Stromspannung entfernt, und der Zersplitterungsanstieg wird analysiert. Für größere Trennungen zwischen ähnlichen großen Bruchstücken kann entweder die Stromspannung oder Durchlaufzeit vergrößert werden. Erweitert stößt auf einen niedrigen Stromspannungsgel-Ertrag die genaueste Entschlossenheit. Stromspannung, ist jedoch, nicht der alleinige Faktor in der Bestimmung der Elektrophorese von Nukleinsäuren. RNS triglycerides prüft auch nach, ob Glyzerin begründet werden muss.

Die zu trennende Nukleinsäure kann auf mehrere Weisen vor der Trennung durch die Elektrophorese bereit sein. Im Fall von großen DNA-Molekülen wird die DNA oft in kleinere Bruchstücke mit einer DNA-Beschränkung endonuclease (oder Beschränkungsenzym) geschnitten. In anderen Beispielen, wie PCR hat Proben verstärkt, die Enzym-Gegenwart in der Probe, die die Trennung der Moleküle betreffen könnte, wird durch verschiedene Mittel vor der Analyse entfernt. Sobald die Nukleinsäure richtig bereit ist, werden die Proben der Nukleinsäure-Lösung in die Bohrlöcher des Gels gelegt, und eine Stromspannung wird über das Gel für eine angegebene Zeitdauer angewandt.

Die DNA-Bruchstücke von verschiedenen Längen werden mit einem Leuchtstofffärbemittel vergegenwärtigt, das für die DNA wie Ethidium-Bromid spezifisch ist. Das Gel zeigt Bänder entsprechend verschiedenen Nukleinsäure-Molekül-Bevölkerungen mit dem verschiedenen Molekulargewicht. Bruchstück-Größe wird gewöhnlich in "nucleotides" berichtet, "stützen Sie Paare" oder "Kilobyte" (für Tausende von Grundpaaren) abhängig davon, ob einzeln - oder doppelt gestrandete Nukleinsäure getrennt worden ist. Bruchstück-Größe-Entschluss wird normalerweise vergleichsweise zu gewerblich verfügbaren DNA-Anschreibern getan, die geradlinige DNA-Bruchstücke der bekannten Länge enthalten.

Die Typen des für die Nukleinsäure-Elektrophorese meistens verwendeten Gels sind agarose (für relativ lange DNA-Moleküle) und polyacrylamide (für die hohe Entschlossenheit von kurzen DNA-Molekülen, zum Beispiel in der DNA sequencing). Gele sind in einem "Platten"-Format solcher als dieser gezeigte in der Zahl herkömmlich geführt worden, aber kapillare Elektrophorese ist wichtig für Anwendungen wie DNA des hohen Durchflusses sequencing geworden. In der Bewertung des DNA-Schadens verwendete Elektrophorese-Techniken schließen alkalische Gel-Elektrophorese ein und haben Feldgel-Elektrophorese pulsiert.

Das Maß und die Analyse werden größtenteils mit einer Spezialgel-Analyse-Software getan. Kapillare Elektrophorese-Ergebnisse werden normalerweise in einer Spur-Ansicht genannt einen electropherogram gezeigt.

Faktoren, die Wanderung von Nukleinsäuren betreffen

Der wichtigste Faktor ist die Länge des Nukleinsäure-Moleküls, kleineres Molekül-Reisen schneller, außer in der Feldinversion, wo es möglich ist, "Band-Inversion" - großes Molekül-Reisen schneller zu haben, als kleine Moleküle. Aber die Angleichung des Nukleinsäure-Moleküls, wie % einzelnes Ufer, das Superumwickeln ist usw. auch ein Faktor. Wenn man Moleküle durch die Größe analysiert, ist es am günstigsten, nur geradlinige Moleküle zu analysieren, um dieses Problem, z.B DNA-Bruchstücke aus einer Beschränkungsauswahl, geradlinige DNA PCR Produkte oder RNAs zu vermeiden. Gel-Elektrophorese von Agarose wird weit verwendet, um kreisförmige DNA mit der verschiedenen sich superzusammenrollenden Topologie aufzulösen, und Bruchstücke aufzulösen, die sich wegen der DNA-Synthese (Arbeit von Fangman) unterscheiden.

DNA-Schaden wegen der vergrößerten Quer-Verbindung wird dosieren abhängig reduzieren electrophoretic DNA-Wanderung.

Die Erhöhung des agarose oder der polyacrylamide Konzentration eines Gels reduziert die Wanderungsgeschwindigkeit und ermöglicht Trennung von kleineren Nukleinsäure-Molekülen. Je höher die Stromspannung, desto schneller die DNA-Bewegungen. Aber Stromspannung wird durch die Tatsache beschränkt, dass sie das Gel heizt und es schließlich veranlasst zu schmelzen. Hochspannungen vermindern auch die Entschlossenheit (über ungefähr 5 bis 8 V/cm).

Conformations einer DNA plasmid, der mit einem Beschränkungsenzym nicht geschnitten worden ist, wird sich mit verschiedenen Geschwindigkeiten bewegen (am langsamsten zum schnellsten: eingeschnittener oder offener kreisförmiger, geradliniger oder superaufgerollter plasmid).